Der Beitrag ist zwar etwas spät, aber vllt hilft er ja trotzdem
DNA-Sequenzierung nach Sanger - auch Kettenabbruchverfahren genannt ist ein Verfahren, um die unbekannte Basensequenz eines DNA-Abschnitts herauszufinden, als quasi die Abfolge der 4 verschiedenen Basen
Ablauf:
- unbekannter DNA-Doppelstrang durch PCR vervielfältigt
- Denaturierung der Doppelstränge zu einem Einzelstrang
- in insgesamt 4 Reaktionsgefäße kommt jeweils:
- der unbekannte DNA-Einzeltrang
- DNA-Polymerase
- DNA-Primer
- Desoxy-Nukleotide (A;T;G;C) aller 4 Basentypen
- je ein (!) Typ Abbruchnukleotide -> nach deren Einbau können keine weiteren Nukleotide mehr binden
- DNA-Polymerase setzt an Primer an und beginnt Desoxy-Nukleotide an den komplementären Einzelstrang zu binden, bis ein Abbruch-Nukleotid eingebaut wird
- es werden viiieeel mehr "normale" Nukleotdide als Abbrcunukleotide eingebaut (200:1) -> es entstehen Stränge unterschiedlicher Länge, je nachdem wann das Abbruchnukleotid eingebaut wird
- die Stränge enden innerhalb eines Gefäßes aber immer mit der gleichen Base (nämlich mit der Base des Abbruchsnukleotids)
- mit der Gelektrophorese werden alle Einzelstränge aller 4 Reaktionsgefäße nach ihrer Länge sortiert
- die nach Größe sortierten Fragmente geben die Basensequenz des synthetisierten DNA-Strangs an -> diese ist komplementär zur gesuchten Sequenz des DNA-Abschnitts
- also z.B.: DNA-Sequenz: CTGCA ----> gesuchte Sequenz: GACGT
Somit hat man die unbekannte DNA-Sequenz herausgefunden!
DNA-Sequenzierung nach Sanger - auch Kettenabbruchverfahren genannt ist ein Verfahren, um die unbekannte Basensequenz eines DNA-Abschnitts herauszufinden, als quasi die Abfolge der 4 verschiedenen Basen
Ablauf:
- unbekannter DNA-Doppelstrang durch PCR vervielfältigt
- Denaturierung der Doppelstränge zu einem Einzelstrang
- in insgesamt 4 Reaktionsgefäße kommt jeweils:
- der unbekannte DNA-Einzeltrang
- DNA-Polymerase
- DNA-Primer
- Desoxy-Nukleotide (A;T;G;C) aller 4 Basentypen
- je ein (!) Typ Abbruchnukleotide -> nach deren Einbau können keine weiteren Nukleotide mehr binden
- DNA-Polymerase setzt an Primer an und beginnt Desoxy-Nukleotide an den komplementären Einzelstrang zu binden, bis ein Abbruch-Nukleotid eingebaut wird
- es werden viiieeel mehr "normale" Nukleotdide als Abbrcunukleotide eingebaut (200:1) -> es entstehen Stränge unterschiedlicher Länge, je nachdem wann das Abbruchnukleotid eingebaut wird
- die Stränge enden innerhalb eines Gefäßes aber immer mit der gleichen Base (nämlich mit der Base des Abbruchsnukleotids)
- mit der Gelektrophorese werden alle Einzelstränge aller 4 Reaktionsgefäße nach ihrer Länge sortiert
- die nach Größe sortierten Fragmente geben die Basensequenz des synthetisierten DNA-Strangs an -> diese ist komplementär zur gesuchten Sequenz des DNA-Abschnitts
- also z.B.: DNA-Sequenz: CTGCA ----> gesuchte Sequenz: GACGT
Somit hat man die unbekannte DNA-Sequenz herausgefunden!